Nasceu em Sevilha, em 560. Santo Isidoro era irmão de São Leandro, de São Fulgêncio e de Santa Florentina. Foi educado por seu irmão São Leandro, Bispo de Sevilha.

Isidoro demonstrou ser um estudante com dificuldades para aprender os conteúdos, mas ao estudar as obras de Santo Agostinho e São Gregório Magno, tornou-se o homem mais instruído da sua época e, ao mesmo tempo, também um dos Bispos mais populares e amados.

Em 600, sucedeu o seu irmão São Leandro no governo da Diocese de Sevilha. Em 619, reuniu e presidiu o II Sínodo Sevilhano, e em 633 presidiu o IV Concílio de Toledo. Bispo influente e popular, foi considerado um dos homens mais ativos e empenhados com os problemas de seu tempo. Organizou a vida na Igreja; criou seminários e zelou pela formação dos futuros sacerdotes. Unificou a liturgia, regulamentou a vida monástica.

Seu grande mérito consistiu em salvar a cultura antiga. Era chamado de doutor insigne do nosso século, novíssimo ornamento da Igreja Católica, o último no tempo, mas não na doutrina, o homem mais sábio dos últimos séculos, cujo nome deve ser pronunciado com reverência. É chamado também o último Padre da Igreja do Ocidente.

A sua obra Etimologias, composta de 20 volumes, é uma síntese de todo o saber antigo e de seu tempo. Escreveu também Diferenças e propriedades das palavras, uma espécie de dicionário; A natureza das coisas, versando sobre astrologia e cosmografia; a Crônica, versão sobre história universal; História dos reis godos, vândalos e suevos; Catálogo dos escritores eclesiásticos e A vida e a morte dos santos. Acrescentem-se a essas obras diversos tratados de moral, comentários exegéticos etc.

Faleceu em Sevilha, a 4 de abril de 636. Tendo sido canonizado em 1598, foi formalmente declarado Doutor da Igreja em 1722, pelo Papa Inocêncio XIII.